外泌体都有哪些分离提取方法？

对于外泌体研究，分离和收集外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有：超高速离心、密度梯度离心、磁珠免疫、超滤法、聚合物沉淀等几种主要方法，各种方法均存在不同优缺点。
 

怎么知道提取的外泌体合不合格？

鉴定外泌体提取合格与否有三大法宝：电镜、NTA粒径、Western blot检测。目前外泌体的分离提取还没有到达炉火纯青的地步，几乎没有任何一个单一实验可以确定外泌体的存在。所以提取的外泌体需要通过三大法宝来相互佐证：形态学鉴定（电子显微镜技术）、NTA粒径分析以及Western blot检测标志蛋白（常用的有CD9、CD63、CD81、TSG101、HSP70等）。电镜可以观察样品中是否有与外泌体相似的经典结构，有经典结构说明样品中有外泌体或者与外泌体类似的，如溶酶体、蛋白聚团、支原体等结构。WB检测发现样品中具有外泌体的标志物，可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情况，但依旧不知道样品的整体情况。因为电镜和WB的连用只能证明样品中有外泌体，但是有多少、纯度等就不得而知了。所以这个时候需要再来一个NTA实验，NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征，以达到跟电镜和WB相辅相成的作用。
 

外泌体蛋白质组学研究有何作用？
外泌体可通过传递信息影响靶细胞的功能，激活细胞信号通路，在免疫、凝血、肿瘤等生理病理过程中发挥作用。而其中蛋白质的差异表达是区分不同来源外泌体的重要特点，是研究外泌体起源的重要途径。蛋白质组学已经逐渐成为研究各种亚细胞组分蛋白质组的重要工具。针对外泌体进行蛋白质组学研究，可以揭示疾病发病机制、寻找疾病诊断和预后的生物标志物、筛选疾病治疗靶点等。