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Western杂交(抗原—抗体杂交)

人阅读 发布时间:2018-12-26 14:44

检测目的基因是否进入到受体细胞的方法,一般包括分子水平检测和个体水平检测。其中分子检测有3个层次:

1目的基因是否整合到受体细胞染色体DNA上;
2目的基因是否转录出MRNA,3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用DNA分子杂交技术检测;
3可以用抗体-抗原的方法检测。个体水平的检测包括抗虫、抗病的接种实验,以确定是否具有抗性及抗性的程度;基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较等。

stern杂交──蛋白质分子(抗原—抗体)之间的杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。

具体做法是:

第一步,将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质;

第二步,将表达出的蛋白质注射动物进行免疫,产生相应的抗体,并提取出抗体(一抗);

第三步,从转基因生物中提取蛋白质,走凝胶电泳;

第四步,将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上;

第五步,将抗体(一抗)与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交,这时抗体(一抗)与目的基因表达的蛋白(抗原)会特异结合。

由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带,所以加入一种称为二抗的抗体,它可以与一抗结合,二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质,则结果为阳性。

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