辉骏生物腺病毒感染目的细胞预实验

实验目的：确定腺病毒感染目的细胞的最低病毒量，各个细胞株的腺病毒转导效率都不太一样， 其中尤以淋巴细胞株最难转导。

辉骏生物腺病毒感染目的细胞具体实验步骤：

1.    实验前一天收集处于对数生长期，生长状态良好的目的细胞，用完全培养基稀释至1×105cells/mL，接种于96孔板（至少接种15个孔的量），每孔接种100  μL上述细胞悬 液（即1×104 cells/well）。5% CO2、37 ℃ 二氧化碳培养箱内培养过夜。

2.    准备12个无菌的1.5 mL EP管，分别加入180 μL的完全培养基。

3. 有限稀释法稀释病毒，从10-1~10-12：取20 μL腺病毒原液加入到第一个管的180 μL完全 培 养基中做1:10稀释（10-1）；然后以此为起点，从第一个管取20 μL稀释液到第二管 再做1:10稀释（10-2），直至稀释到10-12。

4.    从孵箱取出96孔板，显微镜下观察确定细胞生长状态均良好。吸掉孔内旧的培养基， 按10-1~10-12的浓度梯度，依次加入100 μL的病毒稀释液到接种有目的细胞的96孔板中， 每种浓度接种一孔，没有加入病毒液的细胞孔中加入同样体积的完全培养基作为对照 组。37  ℃，5%CO2二氧化碳培养箱内培养。

5.    6-12 h以后观察细胞状态。如果细胞实验组与空白组无明显差异，表明病毒对细胞无明 显毒性反应，不要换液，继续培养。